Сканирующая электронная микроскопия Salmonella enterica

Muhsin Özel, Gudrun Holland, Rolf Reissbrodt / RKI

Некоторые вакцины приводят к неспецифической активации иммунного ответа. Исследовательская группа из Ливерпуля изучила реакцию иммунной системы на ведение живой ослабленной вакцины против брюшного тифа Ty21a. Оказалось, что Ty21a изменяет экспрессию генов иммунных клеток и влияет на их активность в ответ на другие антигены, то есть помогает бороться и с другими патогенами. Статья опубликована в Science Advances.

По готовности организма бороться с чужеродными объектами различают врожденный и приобретенный иммунитет. Первый обладает способностью эффективно атаковать опасный биоматериал, который впервые попадает в организм. Он реализуется фагоцитами, гранулоцитами и некоторыми лимфоцитами. Приобретенный иммунитет быстро работает только при повторном проникновении объекта в организм. За него ответственны Т- и В-лимфоциты.

Для того, чтобы тренировать иммунные клетки организма перед встречей с настоящей инфекцией, используют вакцины. Например, для профилактики кори, краснухи, полиомиелита, туберкулеза людям вводят ослабленные живые штаммы этих микроорганизмов. Иммунные клетки запоминают их и при повторном попадании уже активного штамма быстрее распознают и убивают его. Недавно было показано, что вакцины против туберкулеза (БЦЖ, Бацилла Кальмета-Герена), кори и оральная полиомиелитная вакцина повышают эффективность работы иммунитета в целом, снижая общую летальность в случае инфекционных заболеваний.

Группа ученых из Ливерпульского университета и Ливерпульской школы тропической медицины под руководством Мелиты Гордон (Melita Gordon) продемонстрировала неспецифический эффект оральной вакцины Ty21a против штамма Salmonella typhi, вызывающего брюшной тиф. Они анализировали рецепторы моноцитов у добровольцев через две недели, три и шесть месяцев после вакцинации. Оказалось, что через три месяца гены некоторых рецепторов более активно экспрессируются, например TLR-4 и TLR-5. Так как моноциты циркулируют в крови примерно сутки, исследователи сделали вывод, что происходит эпигенетическое изменение регуляции генов предшественника этих клеток.

Также ученые культивировали in vitro Т- и В-лимфоциты, моноциты контрольной и вакцинированной Ty21a групп и оценивали их активность после стимуляции разными антигенами. Например, моноциты вакцинированных добровольцев секретировали больше интерферона-γ, а B-лимфоциты — больше интерлейкина 4 в ответ на антиген гриба Candida albicans. Авторы отметили, что в сравнении с другими вакцинами, приводящими к подобным эффектам, Ty21a безопаснее и дешевле. А благодаря стимулирующему неспецифическому действию на иммунитет ее можно включить в программы по вакцинации.

Два варианта действия вакцины на иммунную систему. Сверху: традиционное формирование специфической памяти клеток адаптивного иммунитета. Снизу: усиление вакциной неспецифической активности клеток врожденного иммунитета, направленной на уничтожение разных патогенов.

Методические рекомендации

4.2. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Бактериологическая диагностика брюшного тифа и паратифов А, В и С

Дата введения: с момента утверждения

2. РЕКОМЕНДОВАНЫ К УТВЕРЖДЕНИЮ Лабораторным Советом Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 24.12.07 N 11фц/5327).

3. УТВЕРЖДЕНЫ Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г.Онищенко 29 декабря 2007 г. 0100/13745-07-34

4. ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ с момента утверждения.

5. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ.

Список сокращений

АБП — антибактериальный препарат
ВСА — висмут-сульфит агар
ЛПУ — лечебно-профилактическое учреждение
МПК — минимальная подавляющая концентрация
П — промежуточный
У — устойчивый
Ч — чувствительный
РИФ — реакция иммунофлюоресценции
ЦНС — центральная нервная система
В таблицах:
«+» — положительная реакция в первые сутки;
«-» — отрицательная реакция на 4-20 сутки;
«(+)» — замедленная положительная реакция на 2-20 сутки;
d — различные ферментативные реакции.
Возможна дифференциация на ферментативные варианты.

Общие положения

3.1. Брюшной тиф и паратифы А, В и С являются антропонозными кишечными инфекциями, вызываемыми микроорганизмами Salmonella Typhi, Salmonella Paratyphi A, Salmonella Paratyphi В и Salmonella Paratyphi С. В настоящее время чаще регистрируется брюшной тиф, реже — паратиф В, редко — паратиф А и крайне редко — паратиф С.

3.2. Заболевания характеризуются язвенным поражением лимфатической системы тонкой кишки, бактериемией, лихорадкой, циклическим клиническим течением с выраженной интоксикацией, розеолезной сыпью на кожных покровах туловища, гепато- и спленомегалией. Более характерен запор, нежели диарея. Изъязвление пейеровых бляшек подвздошной кишки примерно в 1% случаев приводит к кишечному кровотечению и прободению кишечника с самыми неблагоприятными последствиями для больного.

3.3. Диагноз брюшного тифа и паратифов А, В и С ставится на основании клинических признаков болезни с учетом эпидемиологического анамнеза и данных комплексного лабораторного обследования, которое включает классические бактериологический и серологический методы. Бактериологическая диагностика имеет приоритетное значение, т.к. в этом случае удается получить наиболее полную информацию о биологических свойствах возбудителя, включая его чувствительность к антибактериальным препаратам.

3.4. Применение антимикробных препаратов для этиотропной терапии брюшного тифа и паратифов позволило, с одной стороны, снизить летальность с 10-20% до уровня менее 1%, а с другой стороны — осложнило лабораторную диагностику, т.к. нередко забор материала для лабораторного исследования осуществляется уже после начала антибиотикотерапии. Этот факт заставляет более тщательно подходить к вопросу выбора материала для исследования, взятия исследуемого материала, техники исследования.

3.5. Современной особенностью эпидемиологии брюшного тифа является резкое увеличение частоты завоза (заноса) инфекции с эндемичных по этому заболеванию территорий, стран ближнего и дальнего зарубежья, а также заражение жителей России при выезде в эти страны и в процессе миграции внутри страны. Другой особенностью является наличие обширного контингента высокого эпидемиологического риска в виде лиц без определенного места жительства, среди которых регистрируется высокая заболеваемость брюшным тифом.

3.6. Данные методические рекомендации составлены с целью унификации методов бактериологической диагностики брюшного тифа и паратифов А, В и С, а также правильной интерпретации результатов лабораторного исследования с учетом современных особенностей клиники, лечения и эпидемиологической обстановки на конкретных территориях.

Бактериологическое исследование крови

Показанием к исследованию крови является подозрение на тифо-паратифозные заболевания или лихорадочное состояние невыясненного происхождения (лихорадка неясного генеза), наблюдающееся в течение 5 и более дней (СП 3.1.1.2137-06).
Соотношение кровь — питательная среда должно быть 1:10-1:60. Количество независимо отбираемых проб крови и время их взятия определяется лечащим врачом согласно МУ 4.2.2039-05 при лихорадке неясного генеза или согласно МУ 04-723/3 МЗ СССР (1984) при подозрении на тифо-паратифозные заболевания. У больных, получающих антибактериальные препараты, пробы необходимо собирать непосредственно перед введением (приемом) следующей дозы препарата.
При наличии лихорадки оптимальным является взятие крови на фоне повышения температуры тела (но не на пике температуры!). Посев на питательные среды проводят непосредственно у постели больного.
При подозрении на тифо-паратифозные заболевания для посева крови можно использовать среду Рапопорт, 20%-й желчный бульон, мясопептонный бульон с добавлением 1%-й глюкозы (во флаконах по 100 мл). Ранее использовали посев крови в стерильную дистиллированную (водопроводную) воду. Однако предпочтительнее использовать специальные среды для посева крови.
Количество засеваемой крови в разгар лихорадки может составлять 10 мл, в более поздние сроки — до 20 мл (у детей — до 5 мл).
При лихорадке неясного генеза продолжительностью более 5 дней, как правило, должны исследоваться несколько проб крови. Взятие крови из вены проводят согласно МУ 4.2.2039-05. Это необходимо для дифференциации истинной бактериемии от случайной контаминации крови при венопункции (вероятность загрязнения пробы вследствие случайного прокола сальной или потовой железы составляет 3%). Для посева крови в этом случае используют две среды: 1) среду для аэробов и факультативных анаэробов и 2) среду для облигатных анаэробов (например, «двойная» среда + тиогликолевая среда согласно приказу МЗ СССР от 12.04.85 N 535) или универсальную среду для аэробов и анаэробов.
Предпочтительно использовать промышленно произведенные среды, разрешенные к применению в России.

Посевы инкубируют при 37 °С в течение 10 суток с ежедневным просмотром. При этом флаконы с «двойной» средой наклоняют, омывая плотную часть среды.
При отсутствии признаков роста на 10-й день выдается отрицательный ответ.
При наличии признаков роста (помутнение, покраснение среды Рапопорт, появление видимых колоний на плотной части «двойной» среды) проводят высев параллельно на полиуглеводную среду и плотную среду в чашках Петри (кровяной агар в случае лихорадки неясного генеза и среда Эндо при подозрении на тифо-паратифозные заболевания).
Прямой высев на полиуглеводные среды проводят для сокращения сроков исследования, исходя из предположения, что при посеве крови с высокой вероятностью будет наблюдаться рост монокультуры возбудителя. Для контроля этого предположения и выделения чистой культуры путем откола отдельных колоний необходим параллельный высев на среду Эндо или кровяной агар.
Если на этих средах наблюдается рост монокультуры, то можно учитывать биохимические свойства по полиуглеводной среде. Для контроля чистоты культуры необходимо провести микроскопию мазка с полиуглеводной среды, окрашенного по Граму. На этом этапе возможна также постановка реакции агглютинации на стекле с соответствующими агглютинирующими О- и Н-сальмонеллезными сыворотками и выдача предварительного ответа.
Схема бактериологического исследования крови пациентов с подозрением на брюшной тиф и паратифы представлена на рис.1.

Рис.1. Схема бактериологического исследования крови пациентов с подозрением на брюшной тиф и паратифы

Рис.1. Схема бактериологического исследования крови пациентов с подозрением на брюшной тиф и паратифы

Схема бактериологического исследования крови пациентов при лихорадке неясного генеза представлена на рис.2.

Рис.2. Схема бактериологического исследования крови пациентов с лихорадкой неясного генеза

Рис.2. Схема бактериологического исследования крови пациентов с лихорадкой неясного генеза

Ход дальнейшей идентификации культуры по культурально-морфологическим, ферментативным свойствам и серологической характеристике изложен далее в соответствующих разделах.

Брюшной тиф лечение

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *