Изобретение относится к области медицинской микробиологии и касается поливалентной вакцины против лентоспироза человека и способа ее получения. Вакцина содержит в качестве антигенов штаммы 4-х серогрупп: Leptospira Icterohaemorrhagiae Copenhageni НИИЭМ 466, Leptospira Grippotyphosa grippotyphosa НИИЭМ 30/469, Leptospira Pomona mozdok НИИЭМ 48В/470 и Leptospira Sejroe sejroe НИИЭМ 751/471. Способ получения вакцины включает выращивание биомассы лептоспир на полусинтетической среде с белками крови человека, инактивирование ее формальдегидом, концентрацию микробной массы методом ультрафильтрации на полых полиамидных волокнах, очистку биомассы от компонентов среды культивирования путем двукратного отмывания физиологическим раствором, стандартизацию микробной массы по оптическому кишечному стандарту мутности 10 единиц и консервирование формальдегидом. Предлагаемая вакцина по сравнению с существующей коммерческой поливалентной лептоспирозной вакциной обладает более высокими антигенными и протективными свойствами. 2 с.п. ф-лы, 4 табл.

Изобретение относится к области медицинской микробиологии, в частности к способам получения вакцин, применяемых для профилактики лептоспироза у людей.

Лептоспироз в России является одним из наиболее распространенных зоонозных инфекций, играющих важную роль в патологии человека и животных и наносящих существенный социально-экономический ущерб народному хозяйству. Наличие на территории Российской Федерации активных природных и антропургических очагов лептоспироза представляет постоянную угрозу заражения людей этой инфекцией. Несмотря на это эффективные лечебно-профилактические иммунобиологические препараты отсутствуют. Известна коммерческая поливалентная гретая феноловая вакцина для профилактики лептоспироза у людей . Способ ее получения включает выращивание лептоспир 4-х серогрупп на фосфатно-сывороточной среде Терских с кроличьей сывороткой, инактивирование микробной массы прогреванием, смешивание выращенных культур в определенных сочетаниях с последующим консервированием фенолом, расфасовку, проверку стерильности, безвредности и специфической активности. Однако этот способ не позволяет получить в вакцине достаточную концентрацию специфических антигенов, что вынуждает вводить ее людям двукратно в относительно больших дозах (2,0 и 2,5 мл). Несмотря на это вакцина не вызывает у привитых напряженного иммунитета и требует повышения ее протективных свойств. Цель изобретения — получение лептоспирозной вакцины, вызывающей иммунитет высокой напряженности. Настоящая цель достигается тем, что в качестве исходных штаммов лептоспир используют новые штаммы 4-х серогрупп: Leptospira Icterohaemorrhagiae Copenhageni 466, L. Grippotyphosa grippotyphosa 30, L. Pomona mozdok 48B, L. Sejroe sejroe 751, обладающие высокой антигенной и иммуногенной активностью. Штаммы депонированы, хранятся в коллекции микроорганизмов НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи. Штамм «Крыса 2» НИИЭМ 466 изолирован в 1984 г. в Ростовской области из почки серой крысы и принадлежит к серовару Copenhageni серогруппы Ictearohaemonhagiae. Культивируется на питательных средах с кроличьей сывороткой и активно размножается на полусинтетических средах с белками крови человека. Обладает стабильной вирулентностью и высокой иммуногенностью. Штамм «Microtus arvalis 30» НИИЭМ 30/469 выделен в 1987 г. из почки обыкновенной полевки и принадлежит к серовару grippotyphosa серогруппы Grippotyphosa. Культивируется на питательных средах с кроличьей сывороткой и на полусинтетических средах с белками крови человека. В дозах 106-107 клеток вызывает у золотистых хомяков острую летальную инфекцию, а в дозах менее 106 клеток — бессимптомную ренальную инфекцию. Штамм «48B» НИИЭМ 48В/470 выделен в 1989 г. в Волгоградской области из почки обыкновенной полевки и принадлежит к серовару mozdok серогруппы Pomona. Размножается на питательных средах с кроличьей сывороткой и на полусинтетических средах с белками крови человека. Вызывает острую летальную инфекцию у золотистых хомяков в дозах 103-104 клеток. Штамм «Mus musculus 751» НИИЭМ 751/471 изолирован в 1987 г. из почки домовой мыши и принадлежит к серовару Sejroe серогруппы Sejroe. Культивируется на питательных средах с кроличьей сывороткой, а также на полусинтетических средах с белками крови человека. В дозах 5х107-108 клеток вызывает у золотистых хомяков бессимптомную ренальную инфекцию. Штамм Leptospira Icterohaemorrhagiae Copenhageni 466, изолированный в 1984 г. в Ростовской области из почки серой крысы. Морфологические признаки. При микроскопировании в темном поле (х400) представляет собой хорошо подвижные серебристо-белые спиралеподобные нити длиной 7-10 мкм, диаметром 0,06-0,1 мкм, заканчивающиеся крючками на концах. Физиологические свойства. Размножается на жидких сывороточных питательных средах Терских и Фервоорта-Вольфа и на твин-протеиновых и твин-альбуминовых средах при температуре 28-30oС и рН 7,2-7,6, достигая максимума на 7-10 сутки. Максимальное накопление в логарифмической фазе роста в сывороточных средах составляет от 5х107 до 7х10 клеток/мл, а в твин-протеиновых средах — 8х107-108 клеток/мл. Характерно вращение лептоспир вокруг своей оси и перемещение без полярной дифференциации. Относятся к микроаэрофилам. Ассимилируют углерод из органических соединений белковой и липидной природы. Вирулентность. Штамм обладает высокой и стабильной вирулентностью, вызывая у золотистых хомячков при внутрибрюшинном заражении в дозе 1,0 мл и концентрации 103-104 клеток летальную инфекцию. Штамм Leptospira Grippotyphosa grippotyphosa НИИЭМ 30/469 выделен в 1987 г. из почки обыкновенной полевки. Морфологические признаки. Типичен по морфологии клеток и представлен крючковыми формами. Физиологические свойства. Культивируется на жидких сывороточных питательных средах и на твин-протеиновых и твин-альбуминовых средах при температуре 28-30oС и рН 7,2-7,6, достигая максимума на 5-7 сутки. Максимальное накопление в логарифмической фазе роста в сывороточных питательных средах составляет от 5х107 клеток/мл, а в твин-протеиновых средах — 8х107 клеток/мл. Относится к микроаэрофилам. Вирулентность. В дозах 106-107 клеток вызывает у золотистых хомяков бессимптомную ренальную инфекцию. Штамм Leptospira Pomona mozdok НИИЭМ 48В/70 выделен в 1989 г. в Волгоградской области из почки обыкновенной полевки. Морфологические признаки. Типичен по морфологии клеток и представлен крючковыми формами. Физиологические свойства. Размножается на жидких сывороточных питательных средах (Терских, Фервоорта-Вольфа) и на твин-протеиновых и альбуминовых средах при температуре 28-30oС и рH 7,2-7,6, достигая максимума на 6-10 сутки. Максимальное накопление в логарифмической фазе роста в сывороточных питательных средах составляет от 5х107 до 7х107 клеток/мл, а в твин-протеиновых средах — 8х107 клеток/мл. Вирулентность. В дозах 103-104 клеток вызывает гибель или заболевание золотистых хомяков. Штамм Leptosoira Sejroe sejroe НИИЭМ 751/471 изолирована 1987 г. из почки домовой мыши. Морфологические признаки. Типичные по морфологии хорошо подвижные спиралеподобные нити длиной 6-10 мкм, диаметром 0,10-0,15 мкм, заканчивающиеся крючками на концах. Физиологические свойства. Культивируется на жидких сывороточных питательных средах и на твин-протеиновых и альбуминовых средах при температуре 28-30oС и рН 7,2-7,6, достигая максимума на 6-8 сутки. Максимальное накопление в логарифмической фазе роста в сывороточных питательных средах составляет от 5х107 до 7х107 клеток/мл, а в твин-протеиновых средах — 8х107 клеток/мл. Вирулентность. В дозах 5х107 — 108 клеток вызывает у золотистых хомяков бессимптомную ренальную инфекцию. Выращивают биомассу лептоспир на среде с белками крови человека, инактивируют ее формальдегидом. Концентрируют микробную массу методом ультрафильтрации на полых полиамидных волокнах, а ее очистку от компонентов среды культивирования и формальдегида проводят путем двукратного отмывания физраствором. Затем стандартизуют микробную массу по оптическому кишечному стандарту мутности ОСО 42-28-29-86 10 единиц и используют формальдегид в качестве консерванта. Пример 1. Получение вакцины. Культуру штаммов лептоспир Icterohaemorrhagiae Copenhageni 466, Grippotyphosa grippotyphosa 30, Pomona mozdok 48В и Sejroe sejroe 751, выращенную на фосфатной среде Терских с 5% кроличьей сыворотки, пересевают во флаконы с полусинтетической накопительной средой с человеческим протеином. Посевы инкубируют в термостате при температуре 28-30oС в течение 7-10 суток. Выращенную микробную массу инактивируют путем добавления в нее формальдегида (0,35+0,05)% концентрации в среде и выдерживают 24 часа при комнатной температуре. Инактивированную биомассу лептоспир каждого штамма концентрируют на установке УПЛ-0,6 с ультрафильтрационными колонками на полиамидных полых волокнах с заданным диаметром пор. Концентрированную микробную массу двукратно отмывают от компонентов среды культивирования и формальдегида стерильным раствором натрия хлорида 0,9%-ного. Затем биомассу лептоспир каждого штамма разводят 0,9%-ным раствором хлористого натрия до 1 млрд микробных тел по оптическому кишечному стандарту мутности ОСО 42-28-29-86 10 единиц. Стандартизованную биомассу лептоспир каждого штамма в равных объемах сводят в бутыли. Полученную вакцину расфасовывают в ампулы и контролируют общепринятыми методами на стерильность, токсичность, безвредность, подлинность и специфическую активность. Полученная по указанной технологии лептоспирозная вакцина содержит в 1 мл следующие химические и биологические вещества: следы пастеризованного протеина человека, до 0,0003 г формальдегида, смесь инактивированных лептоспир 4-х серогрупп в концентрации клеток 70х106

30х106. Пример 2. Получение вакцины. Как в примере 1, но культуру штаммов лептоспир пересевают во флаконы с полусинтетической средой с человеческим альбумином. Пример 3. Изучение антигенных и протективных свойств новой вакцины. Изучение проводят на золотистых хомячках весом (223) г в сравнении с коммерческой вакциной (таблицы 1, 2). Экспериментальную вакцину вводят животным внутрибрюшинно однократно дозой 1,0 мл. При иммунизации коммерческой вакциной используют двукратную схему, рекомендуемую в Инструкции по применению препарата. Через 30 дней от начала вакцинации животных проводят забор крови для получения иммунной сыворотки и исследования ее на наличие специфических антител, которые определяют с помощью реакции микроагглютинации и лизиса (РМАЛ). После забора крови животных заражают внутрибрюшинно по 1,0 мл вирулентной культуры лептоспир серогруппы Icterohaemorrhagiae и ведут наблюдения за ними в течение 10 суток. Предлагаемая новая поливалентная лептоспирозная вакцина по сравнению с коммерческой вакциной (прототип) обладает более выраженными антигенными и протективными свойствами. Пример 4. Результаты государственных испытаний поливалентной лептоспирозной вакцины на добровольцах Государственные испытания вакцины проведены на 153 добровольцах. Испытания показали, что предлагаемая вакцина слабореактогенна и обладает высокой специфической активностью (табл. 3, 4). В качестве препарата сравнения служила коммерческая поливалентная лептоспирозная вакцина (прототип). В ходе испытаний отрабатывались 2 схемы вакцинации: двукратная в дозе по 0,5 мл и однократная в дозе 0,5 мл. Коммерческую вакцину использовали согласно Инструкции по ее применению при двукратном введении в дозах 2,0 мл и 2,5 мл. Предлагаемая новая поливалентная лептоспирозная вакцина по сравнению с коммерческой вакциной (прототипом) обладает более высокой сероконверсией ко всем штаммам лептоспир, входящим в ее состав. Титры специфических антител в сыворотках крови привитых с достоверностью 95% значительно выше, чем у иммунизированных коммерческой вакциной. Различия в антительном ответе между привитыми двукратно и однократно статистически равнозначны (Отчет Государственных испытаний вакцины прилагается). Предлагаемая вакцина имеет важное практическое значение. Она обладает высокой специфической активностью и вызывает у привитых напряженный иммунитет при однократном введении в дозе 0,5 мл. Это позволяет использовать ее для активной профилактики лептоспироза у людей и открывает перспективы разработки новых иммунобиологических препаратов, в частности противолептоспирозного иммуноглобулина человека для лечения больных с отягощенными формами. Внедрение в практику предлагаемой вакцины имеет социально-экономическую значимость. Ее использование в работе лечебно-профилактических учреждений России будет способствовать снижению заболеваемости людей лептоспирозом и сокращению летальных исходов.

Формула изобретения

1. Поливалентная вакцина против лептоспироза человека, содержащая антигены штаммов лептоспир, белки крови, консервант, отличающаяся тем, что в качестве антигенов используют штаммы Icterohaemorrhagiae Copenhageni НИИЭМ 466, Grippotyphosa grippotyphosa НИИЭМ 30, Pomona mozdok НИИЭМ 48B и Sejroe sejroe НИИЭМ 751, причем разведение биомассы штаммов, взятых в равных объемных соотношениях, производят в физиологическом растворе до общей концентрации клеток в 1 мл 70×106

30×106, а в качестве белков крови — пастеризованный протеин человека, при этом полученная вакцина дополнительно содержит в 1 мл следующие компоненты: Формальдегид — 0,0002-0,0003 г Пастеризованный протеин человека — Следы 2. Способ получения поливалентной вакцины против лептоспироза человека, отличающийся тем, что культуру штаммов лептоспир Icterohaemorrhagiae Copenhageni НИИЭМ 466, Grippotyphosa grippotyphosa НИИЭМ 30, Pomona mozdok НИИЭМ 48B и Sejroe sejroe НИИЭМ 751 выращивают на жидкой полусинтетической накопительной среде с белками крови человека, инактивируют формальдегидом, концентрируют ультрафильтрацией на полых полиамидных волокнах, очищают двукратным отмыванием физиологическим раствором и стандартизуют по оптическому кишечному стандарту мутности 10 единиц и используют в качестве консерванта формальдегид до 0,0003 г.

РИСУНКИ

Рисунок 1,Рисунок 2,Рисунок 3,Рисунок 4

PC4A — Регистрация договора об уступке патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение

Прежний патентообладатель:Общество с ограниченной ответственностью «Научно-производственное предприятие «Биомед»,Федеральное государственное учреждение науки «Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

(73) Патентообладатель:Федеральное государственное учреждение науки «Ростовский научно-исследовательский институт микробиологии и паразитологии» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

Договор № РД0055043 зарегистрирован 30.09.2009

Извещение опубликовано: 10.11.2009 БИ: 31/2009

NF4A Восстановление действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение

Дата, с которой действие патента восстановлено: 20.11.2010

Извещение опубликовано: 20.11.2010 БИ: 32/2010

С окончанием зимних холодов так хочется расслабиться, отдохнуть от бесконечных насморков, ангин, кашля и прочих вирусных прелестей.

Однако терять бдительность не стоит. На смену зимним инфекциям стремятся летние, неожиданно омрачая пору прекрасного отдыха и наслаждения. Планируя летний отдых, следует вооружиться необходимыми сведениями о той опасности, которая подстерегает нас практически повсюду.

Человек, конечно, венец творения, но уж очень со всех сторон уязвимый. Встречи с представителями флоры и фауны часто оборачиваются совсем не в нашу пользу. И не только! Вода, которую мы пьем, и та, в которой купаемся, тоже может таить в себе опасность. А ведь летом так сложно удержаться от соблазна нырнуть в манящую прохладу водоема. Хорошо, если этот водоем находится под контролем Санэпиднадзора. А если нет?

Лептоспироз наиболее распространенная инфекция в мире среди болезней, общих для человека и животных. Заболевание характеризуется лихорадкой, симптомами общей интоксикации, поражением почек, печени, нервной системы. При тяжелом течении развиваются серьезные осложнения, такие как желтуха, острая почечная недостаточность, менингит.

Источниками инфекции являются различные животные (лесная мышь, полевка, водяные крысы, землеройки, крысы, собаки, свиньи, крупный рогатый скот и др.). Человек, больной лептоспирозом, источником инфекции не является.

Передача инфекции у животных происходит через воду и корм. Краснодарский край является регионом, с повышенным риском возможности заболевания лептоспирозом. За последнее десятилетие, в связи с проводимой в крае специфической профилактикой лептоспироза среди животных и людей, активной просветительской работой среди населения, количество случаев заболевания лептоспирозом значительно уменьшилось. Квалификация врачей-инфекционистов, современные лабораторно-диагностические методы, используемые в крае, позволили выявлять больных на ранней стадии заболевания, своевременно назначать адекватную терапию, что снизило количество возникновения осложнений заболевания, и количество смертельных исходов от данного заболевания.

Не смотря на успехи современной медицины, вопрос сохраняет свою актуальность и сегодня.

Лептоспирозом чаще заболевают дератизаторы (лица, работающие на заболоченных лугах), работники животноводческих ферм, боен, доярки, пастухи, ветеринары, работники канализационной сети, портов, складских помещений, шахтеры, сельскохозяйственные рабочие, занятые на покосах, жатве, возделывании риса, работники культурных и спортивных учреждений, работающие с животными (цирки, конно-спортивные и другие).

Для лептоспироза характерна выраженная сезонность с максимумом заболеваемости в августе.

Заражение человека чаще всего происходит при контакте кожи и слизистых оболочек с водой, загрязненной выделениями животных. Имеет значение и контакты с влажной почвой, с тушами при убое зараженных животных, разделке мяса, при употреблении некоторых продуктов (молоко и др.), загрязненных выделениями инфицированных грызунов.

Поскольку воротами инфекции является кожа, для проникновения возбудителей заболевания, лептоспир, достаточно малейших нарушений ее целостности. В связи с этим, заражение наступает даже при кратковременном контакте с водой, содержащей лептоспиры.

Возбудители могут проникать и через слизистые оболочки органов пищеварения, конъюнктиву глаз.

Через входные ворота по лимфатическим путям лептоспиры заносятся в различные ораны и ткани (печень, селезенку, почки, центральную нервную систему), где размножаются и накапливаются в течение от 4 до 14 дней.

Внезапно, среди полного здоровья без каких-либо предвестников появляется озноб, нередко сильный, температура тела быстро достигает высоких цифр (39-40°С). Больные жалуются на сильную головную боль, бессонницу, отсутствие аппетита, жажду. Характерным признаком являются сильные боли в мышцах, особенно в икроножных. В процесс могут вовлекаться мышцы бедра и поясничной области, пальпация их очень болезненна. У некоторых больных мышечная боль сопровождается резко выраженной болью кожи. Мышечные боли настолько сильные, что больные с трудом передвигаются или не могут двигаться вовсе.

Лечение больных лептоспирозами проводится только в инфекционном стационаре.

Переболевшие лептоспирозом, подлежат диспансерному наблюдению в течение 6 месяцев с обязательным клиническим обследованием окулистом, невропатологом и терапевтом (детей — педиатром) в первый месяц после перенесенного заболевания. В последующие месяцы диспансерные наблюдения осуществляются ежемесячно участковыми врачами с привлечением специалистов по профилю клинических проявлений. Проводятся контрольные общие анализы крови и мочи, а перенесшим желтушную форму — и биохимический анализ крови. Анализы проводят первые два месяца ежемесячно, а в дальнейшем — в зависимости от результатов обследования.

Снятие с учета по истечении срока диспансерного наблюдения проводится при полном клиническом выздоровлении (нормализация лабораторных и клинических показателей).

Эффективным методом профилактики лептоспироза является вакцинация животных и людей. В вакцинации нуждается в первую очередь население, работающее с животными, а также на мясокомбинатах, в болотистых местностях.

Плановой иммунизации подлежат лица, относящиеся к группам профессионального риска заражения (в любое время года), а также лица, направляемые на строительные и сельскохозяйственные работы в места активно действующих природных и хозяйственных очагов лептоспирозов (не позднее, чем за месяц до начала работ). В неблагополучных по лептоспирозам населенных пунктах иммунизируются главным образом дети, а в природных очагах — рисоводы, мелиораторы рыболовы-любители, дети 7-9 лет и другие лица, подвергающиеся риску заражения. В этих случаях прививки проводятся за 2 месяца до эпидемического сезона. Вакцинация против лептоспироза проводятся ежегодно.

Для предупреждения лептоспироза запрещается употребление сырой воды из открытых водоемов и купание в малопроточных водоемах, доступных сельскохозяйственным животным.

Что вызывает лептоспироз?

Лептоспироз вызывают бактерии, которые передаются с мочой грызунов и поражают людей и некоторых животных, включая собак (зоонозное заболевание). Бактерия наиболее часто встречается в условиях повышенной влажности, например во влажной почве и на болотистых участках. Собаки чаще всего инфицируются через зараженную воду, когда плавают, ходят по лужам или пьют из них.

Можно ли моему щенку сделать прививку против лептоспироза?

Лептоспироз можно предотвратить с помощью вакцинации, поэтому важно проследить за тем, чтобы ваш щенок получил необходимые прививки в нужном возрасте.

Прививки наиболее эффективны, когда строго соблюдается график первичного и повторного введения вакцины. Программу вакцинации щенков обычно начинают в возрасте от 6 до 8 недель. Вакцинацию против лептоспироза чаще всего проводят в возрасте 11–13 недель, а ревакцинацию — в 15–17 недель.

Ваш щенок будет считаться вакцинированным против лептоспироза только после второй серии уколов.

Как узнать, нужно ли моему щенку проходить вакцинацию?

Вакцины для щенков бывают обязательными и рекомендуемыми. Вакцина против лептоспироза является одной из обязательных, поэтому ее непременно введут вашему щенку в рамках программы вакцинации, проводимой ветеринарным врачом.

НАЗНАЧЕНИЕ:

Применяют в хозяйствах, неблагополучных и угрожаемых по заболеванию лептоспирозом, при выявлении в хозяйстве животных, сыворотка крови которых реагирует на лептоспироз в РМА или РА.

ОПИСАНИЕ:

Жидкость с серо-белым осадком, который при встряхивании легко разбивается в медленно оседающую гомогенную взвесь.

ХАРАКТЕРИСТИКА:

Вызывает выработку специфических антител, которые обеспечивают иммунитет против возбудителей лептоспироза. Иммунитет у животных наступает через 14-20 сут после введения вакцины и сохраняется не менее 6 месяцев.

ПРИМЕНЕНИЕ:

Вакцину вводят внутримышечно однократно (за исключением поросят в возрасте от 1 до 3 месяцев, которых вакцинируют двукратно) в следующих дозах:

Вид и возраст

животных

Дозы вакцины (см3)

Срок ревакцинации

(месяцы)

первичная вакцинация

ревакцинации

Свиньи:

1-3 месяца

от 3 до 10 мес

хряки и свиноматки

2+3 (с интервалом 12-15 дней)

ПЕРИОД ОЖИДАНИЯ:

Убой животных на мясо и использование молока для пищевых целей после введения сыворотки разрешается без ограничений.

ФОРМА ВЫПУСКА:

Стеклянные флаконы по 50, 100 и 200 см3.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ:

Хранят вакцину в упаковке изготовителя в защищенном от света месте при температуре от плюс 2 °С до плюс 15 °С. Срок годности вакцины 12 месяцев с даты изготовления при соблюдении условий хранения и транспортирования.

Что делать, если мне кажется, что мой щенок заболел?

Если у вашего щенка появились какие-либо симптомы лептоспироза, вам следует немедленно обратиться к ветеринарному врачу. Поскольку этот вирус является зоонозным, это означает, что он может передаваться между разными видами животных, включая людей. С животными, которые, возможно, заболели лептоспирозом, нужно обращаться с осторожностью. Рекомендуется постоянно носить защитные перчатки.

Вы должны будете рассказать ветеринарному врачу обо всех перенесенных заболеваниях и образе жизни вашего щенка. Врач проведет ряд исследований, в том числе возьмет кровь на анализ, сделает профилирование крови и анализ мочи, чтобы определить, заболел ли ваш щенок лептоспирозом, и назначить соответствующее лечение.

Независимо от того, насколько велика вероятность того, что ваша собака вступит в контакт с возбудителями определенных заболеваний, вы должны следить за тем, чтобы она прошла полный курс обязательных вакцин. Кроме того, вы должны обсудить с ветеринарным врачом образ жизни своей собаки и необходимость получения определенных рекомендуемых вакцин.

Лептоспироз прививка

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *