Исследование для выявления возбудителя урогенитального хламидиоза (Chlamydia trachomatis), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) хламидий в образце биоматериала.

Синонимы русские

Хламидия, возбудитель хламидиоза.

Синонимы английские

Ch. trachomatis, DNA (qPCR, Real-time PCR, RT-PCR), Chlamydia trachomatis by Amplified Detection.

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Отделяемое конъюнктивы, секрет простаты, первую порцию утренней мочи, соскоб из прямой кишки, синовиальную жидкость, соскоб урогенитальный, эякулят, мазок из зева (ротоглотки).

Общая информация об исследовании

Chlamydia trachomatis (хламидия трахоматис) – бактерия, внутриклеточный паразит, возбудитель нескольких заболеваний человека. В частности, некоторые серовары этого вида вызывают трахому и венерическую лимфогранулему. В России наиболее распространена хламидийная инфекция мочеполовой системы (урогенитальный хламидиоз). Она передается половым путем, а также от матери к ребенку при родах. Возможен и контактно-бытовой путь передачи. Chlamydia trachomatis – самый частый возбудитель негонококкового уретрита. У женщин хламидиоз встречается чаще, чем у мужчин.

Инкубационный период составляет от 2 недель до 1 месяца. Часто (примерно в половине случаев) хламидиоз протекает бессимптомно.

Начальные симптомы инфекции: жжение и боль при мочеиспускании, слизистые выделения, помутнение мочи, слабость, немного повышенная температура, у мужчин – воспаление мочеиспускательного канала, которое длится долгое время, у женщин – слизистые или гнойные выделения из влагалища. В дальнейшем могут возникать различные осложнения: эпидидимит, эндометрит, конъюнктивит, артрит и др.

Считается, что хламидийная инфекция опасна при беременности, так как может привести к преждевременным родам, выкидышу, сниженному весу новорождённых и даже гибели плода.

Кроме того, новорождённый ребенок иногда заражается хламидиозом от матери при прохождении через родовой канал, из-за чего у него развивается конъюнктивит либо пневмония.

Для анализа на хламидии и диагностики хламидиоза применяют серологические методы (например, ИФА), посев хламидий, а также выявление ДНК бактерий (например, ПЦР).

У серологических методов и посева есть ряд ограничений, так что тесты на основе ПЦР считаются самыми удобными и чувствительными.

ПЦР в реальном времени (РТ-ПЦР) – это лабораторный метод, который позволяет найти в пробе ДНК возбудителя: если в образце присутствует Chlamydia trachomatis, то реал-тайм ПЦР обнаружит ДНК этой бактерии. Принцип заключается в том, что ДНК возбудителя, которого хотят выявить, много раз копируется с помощью специальных ферментов (ДНК-полимераз). Обычно проходит несколько десятков циклов и в ходе каждого нужная ДНК удваивается. В результате количество исследуемой ДНК увеличивается в миллионы раз и ее можно детектировать с помощью флуоресцентного красителя.

При ПЦР в реальном времени количество ДНК выявляется в процессе копирования, после каждого цикла. Но при этом с помощью РТ-ПЦР нельзя различить формы инфекции (например, свежеприобретенное или давнее заражение).

Для чего используется ПЦР-анализ на хламидии?

  • Для диагностики инфекции, вызванной Chlamydia trachomatis (хламидия трахоматис), и мониторинга ее лечения.

Когда назначается исследование?

  • Для диагностики урогенитального хламидиоза при следующих симптамах:
    • жжение и боль при мочеиспускании,
    • покраснение в области наружного отверстия уретры у мужчин,
    • слизистые выделения из половых путей,
    • помутнение мочи,
    • слабость,
    • субфебрильная температура.
  • Для исключения хламидиоза при планировании беременности (и во время нее).
  • После случайных половых контактов.
  • Если половой партнер заражен хламидиями.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Отрицательный результат

  • Хламидийная инфекция отсутствует. Воспаление вызвано другим возбудителем.

Положительный результат

  • Хламидийная инфекция присутствует. Если есть воспаление, то оно, вероятно, вызвано хламидиями. В этом случае содержание ДНК в пробе высокое.
  • Хламидии присутствуют, однако воспаление может быть вызвано другим возбудителем. В этом случае ДНК хламидий выявлена в небольшом количестве.



Также рекомендуется

  • Chlamydia trachomatis, IgM
  • Chlamydia trachomatis, IgG
  • Chlamydia trachomatis, IgA
  • Посев на Chlamydia trachomatis
  • Посев на Chlamydia trachomatis с определением чувствительности к антибиотикам

Кто назначает исследование?

Врач общей практики, терапевт, инфекционист, гинеколог.

Литература

Технология ПЦР в режиме реального времени (Real-time PCR)

В современной лабораторной диагностике ИППП все большую роль играют молекулярно-биологические методы, и в первую очередь метод ПЦР. Высокая чувствительность и специфичность ПЦР, а также ряд других характеристик в перспективе дают возможность рассматривать его как метод выбора при диагностике большинства инфекций.

Однако существенные сложности на пути широкого внедрения метода ПЦР в практику медико-диагностических лабораторий создает высокий риск контаминации (загрязнения) продуктами ПЦР при проведении определения методом электрофореза. Извлечение продуктов ПЦР из пробирок для проведения детекции создает риск загрязнения реактивов или клинического материала, вызывающей появление ложно-положительных результатов и других артефактов ПЦР-анализа. Поэтому для обеспечения правильной работы требуется выполнение строгих специальных требований к организации лаборатории и работы персонала.

В последние годы началось применение гибридизационно-флуоресцентного методов определения продуктов ПЦР. Данная технология основана на использовании флуоресцентно-меченых олигонуклеотидных зондов и позволяет оценивать накопление специфического продукта амплификации (накопления ДНК, РНК) по увеличению уровня флуоресцентного сигнала. Возрастание флуоресценции обусловлено гибридизацией олигонуклеотидного зонда с комплементарным ему участком ДНК-мишени. При этом избирательное действие зонда дополнительно обеспечивает специфичность. Метод позволяет регистрировать накопление специфического продукта амплификации либо непосредственно в процессе ПЦР («ПЦР в режиме реального времени», «Real-time PCR»), либо после окончания реакции («анализ флуоресценции в конечной точке», «End-point»). Причем, в обоих случаях анализ результатов ПЦР осуществляется без извлечения продуктов реакции из пробирок. Это позволяет свести к минимуму риск контаминации.

— сведение к минимуму риска контаминации и связанных с ней ложно-положительных результатов и артефактов ПЦР; — автоматический анализ результатов, стандартизация результатов, исключение субъективности интерпретации; — возможность количественной оценки содержания ДНК/РНК в клиническом образце.

  • Амплификатор в режиме реального времени Agilent Stratagene MX3005P
  • Амплификатор в режиме реального времени Agilent Stratagene MX3000P
  • Амплификатор детектирующий в режиме реального времени ДТпрайм
  • Амплификатор для количественной ПЦР Agilent Aria MX
  • Амплификаторы в режиме реального времени Thermo QuantStudio
  • Лабораторное оборудование Stratagene для ПЦР
  • Приборы для ПЦР в реальном времени «АНК-32» и «АНК-М»
  • Система ПЦР в реальном времени Applied Biosystems 7500
  • Термоциклер для ПЦР в реальном времени PikoReal
  • Термоциклер для ПЦР в реальном времени TOptical
  • Экспресс-амплификатор в режиме реального времени АНК-4

В настоящее время в практическое здравоохранение внедряется новая технология ПЦР — ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ, Real-Time PCR). Ее принципиальной особенностью является мониторинг и количественный анализ накопления продуктов полимеразной цепной реакции, а также автоматическая регистрация и интерпретация полученных результатов. Этот метод не требует стадии электрофореза, что позволяет снизить требования, предъявляемые к ПЦР лаборатории. Благодаря экономии производственных площадей, уменьшению количества персонала и востребованности количественного определения ДНК/РНК этот метод в последние годы успешно применяется в крупнейших санитарно-эпидемических, диагностических и научно-исследовательских центрах развитых стран мира, замещая ПЦР в ее сегодняшнем («классическом») формате.

ПЦР real time, что это?

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *